Trascrizione del miR-184 mediata da NKX6.1: un meccanismo di protezione β-cellulare nel DM2

I microRNA (miRNA) sono piccoli RNA endogeni non codificanti che regolano funzione e identità delle cellule β  e sono implicati nella patogenesi del diabete mellito di tipo 2 (DM2). Inoltre, i miRNA sono coinvolti nella perdita del fenotipo β-cellulare (dedifferenziamento), proposto come meccanismo di disfunzione delle cellule β nel DM2. In precedenza, abbiamo dimostrato che l’ipoespressione del miR-184 in isole di donatori con DM2 e in isole dedifferenziate in vitro, determina l’aumento del gene target CRTC1 proteggendo dall’apoptosi. Lo scopo di questo lavoro è quello di comprendere il meccanismo di regolazione dell’espressione del miR-184. Mediante analisi in-silico abbiamo identificato 3 siti di legame del fattore di trascrizione NKX6.1 sul promotore umano del miR-184 ed 1 sito di legame sul promotore murino. Per verificare se NKX6.1 fosse ipoespresso nel DM2, in accordo al miR-184, abbiamo valutato la sua espressione in isole pancreatiche di 7 donatori DM2 rispetto a 12 donatori non diabetici ed in isole dedifferenziate in vitro. L’analisi ha rivelato una ridotta espressione di NKX6.1 in isole di donatori DM2 rispetto a donatori non diabetici (p=0.0008) ed in isole dedifferenziate in vitro comparate ad isole native (p=0.0079), in linea con l’ipoespressione del miR-184. Il silenziamento tramite siRNA di NKX6.1 nella linea β-cellulare umana EndoCβH1 ha determinato la riduzione dell’espressione del miR-184; inoltre, la traslocazione di NKX6.1 dal nucleo al citoplasma nella linea β-cellulare murina MIN6, indotta tramite trattamento con H2O2, ha ridotto l’espressione del miR-184. Infine, l’analisi di immunoprecipitazione della cromatina ha dimostrato il legame di NKX6.1 sul promotore del miR-184 umano e murino; tale legame è ridotto nelle EndoCβH1 silenziate per NKX6.1 e nelle MIN6 trattate con H2O2.
In conclusione, NKX6.1, associato al mantenimento del fenotipo β-cellulare, è ridotto nelle isole pancreatiche durante il DM2 e regola l’espressione del miR-184, dimostrando un diretto coinvolgimento di tale miRNA nel processo di dedifferenziamento e protezione.